Alternativa B-D-A-E-C
Introdução
Esta questão aborda o fluxo de trabalho em biologia molecular para análise genética usando técnicas de PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) e métodos complementares. É importante entender que nem todas as etapas são estritamente parte do ciclo de PCR, mas sim de um protocolo completo de análise genética.
Desenvolvimento
Vamos analisar cada etapa logicamente:
| Etapa | Descrição | Posição no Fluxo |
|---|
| B | Extração de DNA das bactérias | Primeiro passo |
| D | Fragmentação com enzima de restrição | Pré-PCR ou pós-PCR |
| A | Ligação de primers (anéisamento) | Dentro do PCR |
| E | Polimerização (extensão) | Dentro do PCR |
| C | Eletroforese (visualização) | Último passo |
Passo a Passo Lógico:
- Extração de DNA (B): Você precisa primeiro obter o material genético das amostras bacterianas antes de qualquer manipulação
- Fragmentação (D): Se necessário, usa-se enzimas de restrição como Xba I para cortar o DNA em fragmentos específicos
- Ligação de primers (A): No PCR, os primers se ligam às sequências específicas de DNA alvo (etapa de anelamento)
- Polimerização (E): A polimerase termoestável sintetiza novas cadeias de DNA (etapa de extensão)
- Separação por eletroforese (C): Os produtos finais são separados e visualizados em gel por ação de campo elétrico
Análise
- B deve ser primeiro: Sem DNA extraído, não há reação possível
- D vem antes ou junto com preparação do PCR: Enzimas de restrição preparam o DNA
- A e E são partes do ciclo PCR: Primer binding precede síntese
- C é sempre o último: Eletroforese analisa o resultado final
Conclusão
A sequência correta é B → D → A → E → C, representando o fluxo lógico desde a obtenção da amostra até a visualização dos resultados.